胞内劳森菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2014.10.021

畜牧兽医学报 ›› 2014, Vol. 45 ›› Issue (10): 1733-1738.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2014.10.021

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胞内劳森菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

白挨泉¹，郭建超^1，2，覃宗华³，蒲文珺¹，马春全¹，李国清^2*，张浩吉^1*

（1.佛山科学技术学院，佛山 528231；2.华南农业大学，广州 510642；3.广州英赛特生物技术有限公司，广州 510000）

收稿日期:2014-03-17 出版日期:2014-10-23 发布日期:2014-10-23
通讯作者: 张浩吉（1963-），男，陕西杨凌人，教授，主要从事预防兽医学的教学与研究，E-mail:zhanghaoji@aliyun.com；李国清（1957-），男，安徽怀宁人，教授，主要从事兽医寄生虫研究，E-mail:gqli@scau.edu.cn
作者简介:白挨泉(1970-)，男，山西兴县人，副教授，主要从事家畜传染病学的教学和研究，E-mail:ericbai1970@163.com
基金资助:
广东省科技计划项目（2012A020602072）

Development of a TaqMan Quantitative Polymerase Chain Reaction Assay for Detecting Lawsonia intracellularis

BAI Ai-quan¹，GUO Jian-chao^1，2，QIN Zong-hua³，PU Wen-jun¹ ，MA Chun-quan¹ ，LI Guo-qing^2* ，ZHANG Hao-ji^1*

(1.Department of Veterinary Medicine，Foshan University，Foshan 528231，China；2.College of Veterinary Medicine，South China Agricultural University，Guangzhou 510642，China；3.Guangzhou Insighter Biotechnology Co.,Ltd ，Guangzhou 510000，China)

Received:2014-03-17 Online:2014-10-23 Published:2014-10-23
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摘要/Abstract

摘要：

为建立猪胞内劳森菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法，针对胞内劳森菌的16S rDNA基因设计合成特异性的引物和TaqMan探针，经过优化各项反应条件，建立了TaqMan荧光定量PCR检测方法。该方法仅对胞内劳森菌靶基因有信号，其相关性方程为Ct=－3.318×log(conc)+ 38.840（R²=0.998），具有良好的线性关系，对标准质粒最低检出量为5.55 copies•μL^－1，组内样品的变异系数低于2%。表明该TaqMan荧光定量PCR方法的特异性强、敏感度高、重复性好，具有较好的实用性，能准确定量DNA样品中靶基因的拷贝数，适合于对临床样品中胞内劳森菌定性、定量检测和防治效果的评价。

Abstract:

Based on the 16S rDNA，specific primers and probe were designed，and a TaqMan quantitative polymerase chain reaction assay (TaqMan-PCR) was developed to determinate Lawsonia intracellularis.The results showed that the correlation equation of this TaqMan-PCR method was Ct=-3.318×log(conc)+38.840，and had a good linear relativity (R²=0.998).The TaqMan-PCR prove to be a sensitive，specific，reproducible，and accurate method，and can detecting as little as 5.55 copies•μL^－1 standard plasmid with 16S rDNA of L.intracellularis. The new TaqMan-PCR could be applied for qualitative and quantitative detection of L.intracellularis from clinical sample and the evaluation of treatment effect.

中图分类号:

S852.613

白挨泉，郭建超，覃宗华，蒲文珺，马春全，李国清，张浩吉. 胞内劳森菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 畜牧兽医学报, 2014, 45(10): 1733-1738.

BAI Ai-quan，GUO Jian-chao，QIN Zong-hua，PU Wen-jun，MA Chun-quan，LI Guo-qing，ZHANG Hao-ji. Development of a TaqMan Quantitative Polymerase Chain Reaction Assay for Detecting Lawsonia intracellularis[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2014, 45(10): 1733-1738.

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